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大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
發(fā)布時(shí)間:2025/4/25瀏覽:621次
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  BS-3461   大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒

  一、檢測(cè)原理

  采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入預(yù)先包被NN-T4抗體的酶標(biāo)板中,經(jīng)溫育后形成抗體-抗原復(fù)合物,洗滌后加入酶標(biāo)工作液,再次溫育后形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。加入底物TMB顯色,顏色深淺與NN-T4濃度呈正相關(guān)。

  二、樣本要求

  血清/血漿?:采集后室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,1000g離心20分鐘取上清,避免反復(fù)凍融。

  組織勻漿?:用預(yù)冷PBS(0.01M, pH=7.4)按1:9重量體積比勻漿,5000×g離心5-10分鐘取上清。

  注意事項(xiàng)?:含NaN3的樣本會(huì)抑制HRP活性,需避免使用。

  三、實(shí)驗(yàn)步驟

  試劑準(zhǔn)備?:將濃縮洗滌液稀釋30倍,標(biāo)準(zhǔn)品按說(shuō)明書(shū)稀釋。

  加樣?:標(biāo)準(zhǔn)品和樣本分別加入對(duì)應(yīng)孔位,建議做復(fù)孔。

  孵育?:37℃溫育60分鐘,洗滌去除未結(jié)合物。

  加酶標(biāo)抗體?:加入HRP標(biāo)記抗體,再次溫育30分鐘并洗滌。

  顯色?:加入TMB底物A/B液,避光反應(yīng)15分鐘。

  終止與檢測(cè)?:加終止液后,450nm波長(zhǎng)測(cè)OD值。

  四、數(shù)據(jù)處理

  以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  根據(jù)樣本OD值計(jì)算NN-T4濃度,板內(nèi)/板間變異系數(shù)應(yīng)<10%。

  五、注意事項(xiàng)

  試劑盒需2-8℃保存,有效期通常為6個(gè)月。

  顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制,避免過(guò)度反應(yīng)。

  實(shí)驗(yàn)環(huán)境需清潔,避免交叉污染。

  如需更詳細(xì)的參數(shù)(如標(biāo)準(zhǔn)品濃度范圍、線性回收率等),建議參考試劑盒配套說(shuō)明書(shū)。

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