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以下是關(guān)于人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒的實驗使用說明書綜合整理：
BS-1528人脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法檢測樣本中ADP含量。通過抗-ADP抗體包被微孔板捕獲ADP，再與HRP標(biāo)記的ADP抗體結(jié)合形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后測定450nm吸光度(OD值)，顏色深淺與ADP濃度呈正相關(guān)。
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格(96T) 保存條件
預(yù)包被酶標(biāo)板 1×96孔 2-8℃干燥
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1瓶(1350μg/L) 2-8℃冷藏
酶標(biāo)試劑(HRP標(biāo)記) 6ml×1瓶 2-8℃避光
顯色劑A/B液 各6ml×1瓶 2-8℃避光
20×濃縮洗滌液 50ml×1瓶 2-8℃冷藏
終止液 6ml×1瓶 常溫保存
三、樣本處理要求
血清/血漿?
室溫凝固10-20分鐘后離心(2000-3000rpm，20分鐘)，避免溶血
血漿推薦使用EDTA或肝素抗凝
細(xì)胞培養(yǎng)上清?
直接離心取上清，或PBS稀釋細(xì)胞懸液后凍融裂解
組織樣本?
需用PBS勻漿后離心，分裝保存于-20℃
注意事項?
含NaN3的樣本會HRP活性，需避免使用
反復(fù)凍融不超過3次
四、操作步驟(以96孔板為例)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?
將1350μg/L標(biāo)準(zhǔn)品按梯度稀釋(如：1350→675→337.5→168.75→84.38→42.19→21.09→0μg/L)
加樣孵育?
標(biāo)準(zhǔn)品孔/樣本孔各加100μl，37℃孵育120分鐘
洗滌?
用1:20稀釋的洗滌液洗板5次，每次靜置10-20秒
加酶標(biāo)試劑?
每孔加HRP標(biāo)記抗體50μl，37℃孵育60分鐘
顯色與終止?
加TMB底物A/B液各50μl，避光反應(yīng)15分鐘后加終止液50μl
五、結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢測范圍通常為21.09-1350μg/L，靈敏度可達(dá)0.01μg/ml
六、注意事項
試劑使用前需室溫平衡30分鐘，濃縮洗滌液結(jié)晶需37℃孵育15分鐘
顯色時間超過20分鐘可能導(dǎo)致背景過高
不同批號試劑不可混用
注，以上資料僅供參考，如需具體品牌說明書，可參考本生、天正信達(dá)或分細(xì)生物的詳細(xì)文檔。
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